p 28 , Choice of Fixation
10% Neutral Buffered Formalin – ใช้เป็น choice of fixation
ตาม ASCO-CAP guideline ใน most immunohistochemical and situ hybridization technique
– ถ้าไม่ทั้งหมด ยังต้องใช้ FFPE – formalin-fixed paraffi embedded tiss
แม้ว่าจะตอ้งระวังเกี่ยวกับ requirement for – Ag retrieval
ที่ต้องใช้ formaline – เพราะ morphologic criteria for Dx เป็น established base on formalin-fixed tiss
☁ Penetration – fixative solution มี penetrate at – different rate
– formalin ถือว่าเร็วสุด , แต่ก็ขึ้นกับ dept of penetration – เป็น non-coagulant type fixative
ถือว่าเป็น cross-link prot แบบ long time หลัง จาก penetrate complete
-rate 3.6mm/ hr 7.2 mm / 4hr at 25*c , pH 7
crosslink complete – 48 hr สำหรับ thin section , proper fixation
☁ pH – ไม่ afftect light microscopy
some fixation เป็น actually acid eg – acetic acid
แต่ formalin มันไม่ buffered , acidic low pH ~ 4 – little effect on fine structure of cell
low pH formalin ทำให้เกิด dark pigment ซึ่งสามารถ obscure cellular detail <- ถ้าใช้ buffer formlin pH 7 ก็จะป้องกันอันนี้ ^แสดงว่า ถ้าเราไม่ buffer หรือใช้ pure formaline ก็อาจจะทำให้เกิด dark pigment
☁ Osmolality , isotonic จะดี เพราะมัน hold solution for tiss ในการ transport frozen section or kidney biopsy for special processing
หรือกรณีที่ ไม่ได้ transport short peroid หรือไม่สามารถ fix ตอน excision -> มันจะวางบน gause damped with normal saline (แต่ไม่ต้อง soak จน wet)
– gauze จะ cover ด้วย plastic container eg petri disk – จานเพาะเชื้อ – วางบน top of ice เพื่อป้องกัน autolysis
ทุก factor ที่มีผลกับ fixation – มีผลกับ preservation tiss and celluar
p 29 , Consequence of delayed , incomplete or poor fixation
ถ้า ไม่ proper เช่น non-adherence อาจทำให้เกิด
1. Loss /total disappearance of nuclear chromatin
2. Disappearance of some cells – epithelial cells in intestinal specimens
3. cell shrinkage c artifactual space รอบๆ cell
p 30 , Cellular components and reaction to fixation
▶ Nucleus